新羿数字PCR：更精准的新冠疫苗研发与效果评估技术！

发布日期：2021-08-04

2021年(nian)6月28日，清华大学全球健康与传染病(bing)研(yan)究(jiu)中(zhong)心张林琦教授团队、天津(jin)医科大学周(zhou)东明教授团队于Frontiers in Immunology杂志在(zai)线发表(biao)了关于新冠(guan)(guan)疫(yi)苗(miao)(miao)研(yan)究(jiu)及转化(hua)的文章(zhang)。研(yan)究(jiu)团队以稀有黑猩猩腺病(bing)毒(du)AdC68为(wei)载体研(yan)发的疫(yi)苗(miao)(miao)，在(zai)多种动物模型体内均展(zhan)示了很强(qiang)的保护(hu)作(zuo)用，有望(wang)进一步临床转化(hua)。新羿生(sheng)物数(shu)字PCR技术平(ping)台凭借灵敏度(du)高、准确性强(qiang)、可(ke)绝对定量(liang)等优势，在(zai)新冠(guan)(guan)疫(yi)苗(miao)(miao)研(yan)发与效果评估过程中(zhong)发挥了重要(yao)作(zuo)用。

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研究背景

至今(jin)新(xin)冠(guan)(guan)病(bing)毒仍(reng)在全球肆虐，病(bing)毒的最终控制很大(da)程度取决于安全、高效疫(yi)(yi)(yi)苗的研制与(yu)部署。目前全球已(yi)紧急获批了多(duo)个新(xin)冠(guan)(guan)疫(yi)(yi)(yi)苗，但(dan)疫(yi)(yi)(yi)苗的长期安全性、有效性以(yi)及保护的持久性仍(reng)需进一步(bu)探(tan)讨。

方(fang)法与结果(guo)

灵长类动物实验(yan)：AdC68-19S疫苗通(tong)过(guo)鼻内和肌内两种途径(jing)，单剂量免疫接种恒河(he)猴后，进行SARS-CoV-2活病(bing)毒(du)(du)感染(ran)攻击实验，在不(bu)同时间点(dian)（感染(ran)病(bing)毒(du)(du)后第0、1、2、3、5、7天）采集恒河(he)猴鼻拭子及(ji)肺部样本，进行新冠(guan)病(bing)毒(du)(du)载量检测。

新冠病(bing)毒(du)检(jian)测(ce)方(fang)法：恒河猴(hou)实(shi)施安乐死(si)后(hou)，收(shou)集(ji)肺部组织，在不同时(shi)间点采(cai)集(ji)鼻拭子样本。采(cai)用新羿生物新冠病(bing)毒(du)检(jian)测(ce)试剂与数字(zi)PCR平台，对样本中病(bing)毒(du)的gDNA和sgRNA进(jin)行检(jian)测(ce)分(fen)析。

图1 数字PCR方法介绍

新冠(guan)病毒检测结果：

1. 在SARS-CoV-2病(bing)毒(du)(du)感染攻击后，AdC68-19S疫苗接种的恒(heng)河猴在鼻拭子中(zhong)(zhong)只是(shi)短(duan)暂地检测(ce)(ce)出低(di)水平(ping)的病(bing)毒(du)(du)gRNA或sgRNA，而(er)对照组恒(heng)河猴在整个实(shi)验过(guo)程中(zhong)(zhong)（不(bu)同(tong)时间点(dian)）都持续检测(ce)(ce)出高水平(ping)的病(bing)毒(du)(du)载量（图2）。

图2 恒河(he)猴鼻拭子(zi)中(zhong)病毒(du)gRNA和(he)sgRNA不同时间(jian)点检测结果

2. 同样地，AdC68-19S疫苗免(mian)疫接(jie)种的恒河(he)(he)猴肺组织中没有(you)检测到(dao)新冠病毒gRNA和(he)sgRNA，而接(jie)种空白载(zai)体对照组恒河(he)(he)猴肺组织中的病毒gRNA和(he)sgRNA的载(zai)量分别高达(da)8.36× 105和(he)3.89 × 103 copies/g（图3）。

图3 恒河猴肺组织(zhi)样本(ben)中病(bing)毒gRNA和sgRNA不同时间(jian)点检测(ce)结果

总结

在临床前的(de)(de)(de)动物实验中(zhong)，新(xin)冠(guan)病(bing)毒(du)(du)(du)的(de)(de)(de)精(jing)(jing)准检(jian)测(ce)(ce)对疫(yi)(yi)(yi)苗的(de)(de)(de)效价(jia)评估至(zhi)关重要。张林琦教(jiao)授及合作团队基(ji)于黑猩猩腺病(bing)毒(du)(du)(du)载体研发的(de)(de)(de)疫(yi)(yi)(yi)苗，在实验动物体内(nei)单(dan)剂(ji)量免疫(yi)(yi)(yi)接种后(hou)展(zhan)现了良好的(de)(de)(de)安全性、耐(nai)受(shou)性和免疫(yi)(yi)(yi)原性。新(xin)羿生物新(xin)冠(guan)病(bing)毒(du)(du)(du)检(jian)测(ce)(ce)试剂(ji)盒采用创新(xin)的(de)(de)(de)RNA一步法逆转录数(shu)字PCR技术，结合数(shu)字PCR技术平台，可(ke)(ke)对样本中(zhong)新(xin)冠(guan)病(bing)毒(du)(du)(du)的(de)(de)(de)ORF1ab和N区同时进行高(gao)灵敏度检(jian)测(ce)(ce)，检(jian)测(ce)(ce)特异性好，同时设有内(nei)参基(ji)因进行质控(kong)，保(bao)证检(jian)测(ce)(ce)过程(cheng)精(jing)(jing)准可(ke)(ke)靠。新(xin)羿生物数(shu)字PCR平台关于新(xin)冠(guan)病(bing)毒(du)(du)(du)检(jian)测(ce)(ce)标准以WHO和国家(jia)CDC指(zhi)南为(wei)准，可(ke)(ke)进一步助力新(xin)冠(guan)疫(yi)(yi)(yi)苗的(de)(de)(de)研究与临床转化。

作(zuo)者介绍

清(qing)(qing)华(hua)大学(xue)(xue)(xue)医(yi)(yi)(yi)学(xue)(xue)(xue)院(yuan)博士生李(li)明茜、中国科(ke)学(xue)(xue)(xue)院(yuan)大学(xue)(xue)(xue)博士生郭景奥、中国医(yi)(yi)(yi)学(xue)(xue)(xue)科(ke)学(xue)(xue)(xue)院(yuan)医(yi)(yi)(yi)学(xue)(xue)(xue)生物学(xue)(xue)(xue)研(yan)究(jiu)所鲁(lu)帅尧教(jiao)授、香(xiang)港大学(xue)(xue)(xue)李(li)嘉诚(cheng)医(yi)(yi)(yi)学(xue)(xue)(xue)院(yuan)博士后周润宏、中国科(ke)学(xue)(xue)(xue)院(yuan)大学(xue)(xue)(xue)硕士生史(shi)宏扬以及清(qing)(qing)华(hua)大学(xue)(xue)(xue)医(yi)(yi)(yi)学(xue)(xue)(xue)院(yuan)副研(yan)究(jiu)员史(shi)宣玲为(wei)该研(yan)究(jiu)的(de)第(di)一作者(zhe)，清(qing)(qing)华(hua)大学(xue)(xue)(xue)医(yi)(yi)(yi)学(xue)(xue)(xue)院(yuan)张林琦教(jiao)授、天津医(yi)(yi)(yi)科(ke)大学(xue)(xue)(xue)基础医(yi)(yi)(yi)学(xue)(xue)(xue)院(yuan)周东明教(jiao)授、中国医(yi)(yi)(yi)学(xue)(xue)(xue)科(ke)学(xue)(xue)(xue)院(yuan)医(yi)(yi)(yi)学(xue)(xue)(xue)生物学(xue)(xue)(xue)研(yan)究(jiu)所彭小(xiao)忠研(yan)究(jiu)员以及香(xiang)港大学(xue)(xue)(xue)李(li)嘉诚(cheng)医(yi)(yi)(yi)学(xue)(xue)(xue)院(yuan)陈志伟教(jiao)授为(wei)该研(yan)究(jiu)的(de)共同(tong)通讯作者(zhe)。

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